驢血清制備方法

驢血清制備方法：

此法用于制備間接法抗抗體。因抗原為可溶性，故多需加佐劑。
（1）淋巴結注射法
1）選擇體重2～3Kg的健康雄性家兔（ 2只以上），編號；
2）在家兔兩后腳掌共注射活卡介苗，50mg（約0.6mL．每只足庶部皮下0.1mL，皮內0.2mL）。7～10d后，鼠或國窩處淋巴結腫大如黃豆或蠶豆大小；
3）用二指固定腫大之淋巴結，兩側淋巴結各注射加有*佐劑的抗原o．5mL，共1mL。事先將抗原稀釋為 5～10mg/ml，在免疫前一日加入青、鏈霉素，使青、鏈霉素的濃度分別為1000U/mL和1000mg／mL。4℃，次日取出與佐劑混合成乳劑。許多單位用兩個注射器分別吸取佐劑與抗原，中間用細膠管連接，相互推進若干次，達到乳化目的；
4）10～14d后，于兩側淋巴結各注射加有*佐劑的抗原0.25～0.5mL（這一次也可以省略）；
5）7d后，于兩側淋巴結各注射加有不*佐劑的抗原0.25～0.5mL；
6）試血：第三次免疫后7～10d，耳靜脈取少量血，分離血清，用雙擴散法，中間孔加抗原（1mg/mL），周圍孔加不同稀釋度的待檢抗血清，37℃、 24h，觀察結果，效價在1︰16以上，或者中間孔加抗血清，周圍孔加不同稀釋倍數的抗原。效價達4000倍以上即可應用；
7）放血：效價合格后即可放血。放血前停食12h。動物仰臥固定，頸部剪毛消毒，切開皮膚lOcm，找到頸動脈，將頸動脈和迷走神經剝離。選擇血管中段，用兩止血鉗夾住（約 5cm），切開，放血（2500g重家兔可放血lOOmL）；
8）分離血清：血液放于大試管、平皿或三角瓶中，凝固后，用鉑耳或無菌滴管沿邊緣剝離，先故37122h，再放4℃，使血清充分析出。離心沉淀，鑒定合格，冰箱保存備用。