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    肺炎支原體PCR檢測試劑盒樣品活化方法

    時間:2021/4/8閱讀:257
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    肺炎支原體PCR檢測試劑盒樣品活化方法:

    生物樣品中的通常以無活性的形式存在,在檢測指標活性前必須進行活化處理。
    活化方法如下:
    血清、血漿: 280 μL標準品&樣品稀釋液中加入40 μL樣品,混勻,加入40 μL活化試劑1,室溫孵育10分鐘。再加入40 μL活化試劑2,混勻后立即檢測。
    注意:樣品被稀釋了10倍!
    細胞培養上清:20 μL標準品&樣品稀釋液中加入100 μL樣品,混勻,加入40 μL活化試劑1,室溫孵育10分鐘。再加入40 μL活化試劑2,混勻后立即檢測。
    注意:樣品被稀釋了2倍!
    組織勻漿:1960 μL標準品&樣品稀釋液中加入40 μL樣品,混勻后檢測。
    注意:樣品被稀釋了50倍!
    試驗所需自備物品
    1. 酶標儀(450nm波長濾光片)
    2. 高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
    3. 37℃恒溫箱,雙蒸水或去離子水
    4. 吸水紙
    ELISA實驗中給檢測樣本加樣的步驟詳解
    1.細胞上清:前處理必須是細胞離心去除,每孔直接加100p1即可。如果濃度太高需稀釋時,用標準品稀釋液直接稀釋。
    2.腦脊液:前處理必須是細胞離心去除,每孔直接加100W1即可。如果濃度太高需稀釋時,用標準品稀釋液直接稀釋。
    3.血清血漿:加入50u山樣本分析緩沖液后加50u標本如稀釋量大,請將樣本與樣本分析緩神液等量加入,不足部分用標準品稀釋液補充至100u。
    ①血清標本應是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液。
    ②血漿標本,推薦用EDTA的方法收集若待測樣本不能及時檢測,標本收集后請分裝凍存于-20℃,避免反復凍融。
    ③血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑。
    ④標本應清澈透明,檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除。
    ⑤請勿使用溶血,高血脂或污染的標本檢測,否則結果將不準確。
    4.組織勻漿液的樣本:要制備過程中需要在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑,防止蛋白成份被內源性蛋白酧降解,造成檢測結果的值偏低。因組織勻漿液的樣本蛋白種類多,含量豐富,驗參照血清血漿標本的處理方法進行,否則就會影響實驗結果。具體是加入50u樣本分析緩沖液后加50u標本,需稀釋時,請將樣本與樣本分析緩神液等量加入,不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。

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