ELISA試劑盒、酶標抗體的免疫學(xué)反應(yīng)及酶催化作用

ELISA試劑盒SCI文章操作流程：
檢測抗體多用間接型elisa。以純化抗原包被載體，經(jīng)4℃，以無關(guān)蛋白封閉至少2小時以上，加入待測樣品，室溫孵育1小時，洗滌干凈后加酶標抗體，再經(jīng)室溫孵育、洗滌后，以底物顯色，顯色到一定程度終止反應(yīng)，在酶標儀上讀結(jié)果或以肉眼判斷。
類型：elisa具體方法的類型繁多，試劑的標準化問題還未后解決，溫育的時間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數(shù)等都是影響測定的因素。但參考以上基本過程，無論怎樣變化，均離不開抗原-抗體反應(yīng)、酶標抗體的免疫學(xué)反應(yīng)及酶催化作用。
特點：
1、敏感性高，可檢出濃度在ug~mg/ml水平；
2、特異性強；
3、重復(fù)性好；
4、快速、簡便、廉價。
實驗條件
固相載體：可作為固相載體的物質(zhì)很多，如：纖維素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交聯(lián)葡聚糖、玻璃、硅橡膠、瓊脂糖凝膠等。可以各種形式出現(xiàn)；試管、微量反應(yīng)板凹孔、小珠.....。常用的是聚苯乙烯制品，其吸附性。固相包被的機制一般不外乎物理吸附和共價交聯(lián)，
封閉：以無關(guān)蛋白占據(jù)載體上未被包被的空隙，常用的封閉液是1%牛血清白蛋白或10%小牛血清。
待測樣品：稀釋度要合適，濃度太大會發(fā)生非特異性吸附造成假陽性，過分稀釋會影響抗原-抗體之間的免疫學(xué)反應(yīng)。選擇適稀釋度，在實驗體系中取光密度在1.0左右的稀釋度為宜。
酶結(jié)合物：使用高質(zhì)量的酶結(jié)合物是elisa成功的關(guān)鍵。
ELISA試劑盒SCI文章注意事項
酶聯(lián)免疫技術(shù)的試劑標準化問題尚未完*，溫育過程的時間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數(shù)都是影響后測定的因素。為使實驗得到滿意的結(jié)果，在操作過程中應(yīng)作到
1、每次試驗都必須設(shè)陽性和陰性對照。
2、封閉要*。
3、洗滌要測定。