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每種試劑都有其反應模式，其中溫度和溫育時間控制是重要因素。因孵育溫度高，反應時間長，會造成整板本底高，陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴，ELISA試劑盒反應板不宜疊放，以保證各板溫度都能迅速平衡，為避免蒸發，板上應加蓋。
作為記錄測定結果的儀器，酶標儀的性能穩定與否，決定結果的可靠度。
首先酶標儀應定期進行保養，對濾光片要定期校正；
其次酶標儀波長設置要正確，使用雙波長，一個檢測波長，一個參比波長，以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。
此外，ELISA試劑盒在用酶標儀讀數時先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標儀性能有所不同，使用中應詳細閱讀說明書
綜上所述，盡管目前上以及我國有了部分標準血清或參比血清（血清盤），但是酶聯免疫吸附技術目前在技術上尚未做到標準化。受方法學及技術條件的限制，在酶聯免疫吸附測定中有時不可避免的會出現一定的非特異性，ELISA試劑盒我們可以通過以上措施把非特異性顯色降至低限底，從而提高檢測的特異性，并得到更準確、可靠的實驗結果。
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