ELISA試劑盒試劑配制研究方法

完整的進(jìn)口原裝elisa試劑盒包含以下各組分：已包被抗原或抗體的固相載體；酶標(biāo)記的抗原或抗體；ELISA試劑盒酶的底物；陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品，參考尺度品和控制血清；酶聯(lián)物及標(biāo)本的稀釋液；洗滌液；酶反應(yīng)終止液。ELISA中有三個(gè)必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。
    疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫（2~8℃）干燥的前提下一般可保留6個(gè)月以上。可作ELISA中載體的材料良多，常用的是聚苯乙烯。ELISA試劑盒以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體，反應(yīng)后用磁鐵的吸引進(jìn)行分離，洗滌利便，ELISA試劑盒一般均配以特殊儀器。為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣，可應(yīng)用如下的試驗(yàn)：用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和陰性標(biāo)本，將它們進(jìn)行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操縱步驟進(jìn)行測(cè)定，然后比較結(jié)果。小試管還可以當(dāng)作比色杯，進(jìn)口原裝elisa試劑盒后直接放入分光光度計(jì)中比色。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大進(jìn)步，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕捉包被法，試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的機(jī)能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍留存原來(lái)的免疫學(xué)活性，加之它的價(jià)格低廉，所以被普遍采用。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用力。控制反應(yīng)前提，使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。所有單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差，應(yīng)小于10%。例如，在檢測(cè)抗DNA抗體時(shí)，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè)，并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果。換言之，包被等于抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過(guò)程。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果差別大，這種載體就是這一ELISA測(cè)定項(xiàng)目的合適的固相載體。
    ELISA載體的外形主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。良好的ELISA板應(yīng)該是吸附機(jī)能好，空缺值低，孔底透明度高，ELISA試劑盒各板之間、統(tǒng)一板各孔之間、統(tǒng)一板各孔之間機(jī)能相近。再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點(diǎn)的暴露面處于反應(yīng)狀態(tài)，因此珠式ELISA的反應(yīng)往往更為敏捷。IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外，因此進(jìn)口原裝elisa試劑盒抗體的包被一般均采用直接吸附法。