在細胞培養中zui常用的抗生素是*（常用濃度是25~100ui/ml）與*（25~100μg/ml）。這兩種抗生素常混合使用。在一些實驗室里，它們常規加入所有的培養基中。*（10~100μg/ml）通常有廣譜抗菌效應，并具有溶液穩定性，故也被一些實驗室使用，特別是當有低水平的污染存在時更是這樣。以上這些試劑對霉菌與酵母菌的污染均無效。
盡管很多實驗室在細胞系的培養基中常規加入抗生素作繼代培養，但仍建議不要在原代培養中加入抗生素，其理由之一是獲得的細胞是無菌的，原代培養時的細菌污染很少發生。其次，盡管認為抗生素對細胞代謝的影響可忽略，但避免使用它們，以免細胞生長環境的不穩定。zui重要的是要意識到培養中主要污染物的類型，它們通常暗示了問題的來源。
抗有絲分裂劑
某些DNA合成抑制劑對分裂細胞有毒，但對沒有DNA合成的細胞僅有輕微影響。由于神經元通常缺乏DNA合成能力，因此對抗有絲分裂劑沒有多大反應。這樣的試劑常常用于神經元的培養，以消除或減少非神經元群體。若要殺死所有的非神經元細胞，可以先加入血清或生長因子來保證有高比例的非神經元細胞進行DNA合成，此時再加入抗有絲分裂劑。但是，某些細胞在它的細胞周期的某些時相時對抗有絲分裂劑是不敏感的。不過，可以重復的將抗有絲分裂劑使用于增殖的細胞群體。在CNS神經元的培養中抗有絲分裂劑常常在星形細胞形成單層后加入，此時，星形細胞由于接觸抑制而終止了DNA的合成（即細胞停止增殖），它們不會因抗有絲分裂劑的加入而死亡。
原代培養中用這種方法阻止成纖維細胞的過度增殖是十分必要的。有兩種抗有絲分裂劑常用于神經元的培養： Fluorodexyuridine，是胸苷合成酶抑制劑，一般使用濃度為～10μM。尿苷（10μM）也常使用，可阻止不分裂細胞的RNA合成。另外，阿糖胞苷也常被使用，其使用濃度為5～50μM。使用任何一種抗有絲分裂劑，都必須考慮它的神經原毒性，應該確定zui低效應的使用濃度。阿糖胞苷在很低的濃度下，也會對某些種類的神經元有毒性，可以造成特定神經原的死亡。其他的抗有絲分裂劑尚未表現出這種毒性。
