ELISA試劑盒底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。
通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
ELISA試劑盒是以免疫學反應為基礎，將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。
ELISA試劑盒每次加標本應更換吸嘴，以發生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。
有此測定（如間接法ELISA）需用稀的血清，可在試管 中按規定的稀釋度稀釋后再加樣。
也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標本，ELISA試劑盒然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。
加酶結合物應用液和底物用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。
由于抗原、ELISA試劑盒抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。
ELISA試劑盒測定的標本十分廣泛，體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。
有些標本可直接進行測定(如血清液)，有些則需經預處理(如糞便和某些分泌物)。
大部分ELISA檢測均以血清為標本。
血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。
可用作ELISA的標本十分廣泛，體液（如血清 ）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體 或抗原成份。
有些標本可直接進行測定（如血清 、尿液），有些則需經預處理（如糞便和某些分泌物）。
大部分ELISA試劑盒檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。
制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只要待血清自然凝固、收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫學檢驗中均以血清作為檢測標本。
ELISA試劑盒加標本一般用微量加樣器，按規定的量加入板孔中。
