ELISA重要點

ELISA試劑盒的技能關鍵包含三個方面：試劑的制備、反響條件的挑選和操作的標準化。一、試劑的制備ELISA的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶符號的抗原或抗體和與符號酶直接相關的酶反響底物。以下敘說這些試劑的質料和制備辦法。

（一）固相載體可作 ELISA試劑盒中載體的物質許多，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的功能，抗體或蛋白質抗原吸附其上后保存本來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式。

（二）免疫吸附劑固相的抗原或抗體稱為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過程稱為包被（coating）。由于載體的不同，包被的辦法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板為載體，通常將抗原或抗體溶于緩沖液（zui常用的為pH9.6的碳酸緩沖液）中，加于ELISA板孔中在4℃，經清洗后即可運用。如果包被液中的蛋白質濃度過低，ELISA試劑盒固相載體表面有能被此蛋白質*掩蓋，其后參加的血清標本和酶結合物中的蛋白質也會部分地吸附于固相載體表面，zui終發生非特異性顯色而導致本底偏高。     

（三）抗原和抗體在 ELISA試劑盒施行過程中，抗原和抗體的質量是試驗是否成功的關鍵因素。本法要求所用抗原純度高，抗體效價高、親和力強。 ELISA試劑盒 所用抗原有三個來源：天然抗原、重組抗原和組成多肽抗原。天然抗原取材于動物安排或體液、微生物培育物等，一般含有多種抗原成分，需經純化，提取出特定的抗原成分后才可運用，因而也稱提純抗原（purifiedantigen）。重組抗原（recombinantantigen）和多肽抗原（peptideantigen）均為人工組成品，運用安全，并且純度高，攪擾物質少。