ELISA試劑盒吸光度測定值

  ELISA試劑盒測定疫苗抗體之如何處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。此時(shí)測得的吸光度即為臟物的吸光度值。zui后酶標(biāo)儀給出的數(shù)值為敏感波長下的吸光度值與非常感波長下的吸光度值的差。因此，雙波長比色測定具有能排除由微滴板本身、板孔內(nèi)標(biāo)本的非特異吸收、指紋、刮痕、灰塵等對特異顯色測定吸光度的影響的優(yōu)點(diǎn)。由于ELISA試劑盒測定中單個(gè)空白孔的非特異吸收上有一定程度的不確定性，也就是說每次測定或同次測定空白孔位置的不同均有可能得到不同，故而在ELISA試劑盒測定比色時(shí)，是使用雙波長比色。
  ELISA試劑盒做得很好的話批間CV都要有10～15％左右，用同一個(gè)抗原，但對于包被的抗原濃度對OD的影響不是很大，只要不是差別太大即可。抗血清當(dāng)然要用同一個(gè)稀釋度了。另外比較的話就必每批，每塊板上的樣品都要伴隨著一個(gè)參比品一同做，參比品還是同一個(gè)這樣才能保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可比性。1） 高結(jié)合力
  此種酶標(biāo)板，表面經(jīng)處理后，其蛋白結(jié)合能力大大增強(qiáng)，可達(dá)300~400ng IgG/cm2，主要結(jié)合的蛋白分子量＞10kD。使用該類酶標(biāo)板可提高敏感性，并可相對減少包被蛋白的濃度和用量，ELISA試劑盒不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)。抗原或抗體包被后，以非離子去污劑無法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位，需使用蛋白作為封閉劑。
2) 中結(jié)合力
   此類酶標(biāo)板經(jīng)表面疏水鍵被動(dòng)與蛋白結(jié)合，適合作為分子量＞20kD的大分子蛋白的固相載體，其蛋白結(jié)合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類酶標(biāo)板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性，適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體，可降低潛在的非特異叉反應(yīng)。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。
3)氨基化
   ELISA試劑盒這種酶標(biāo)板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基，其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值，ELISA試劑盒其表面可通過離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合的能力，可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。