細胞支原體污染的一般情況及預防措施

    細胞株若受到細菌、真菌、支原體、或是特定病毒等之污染時，會嚴重的影響實驗的結果。而細菌、真菌等之微生物污染時，較易自培養基等的外觀變化察覺。但是若受到支原體之污染時，細胞之外觀較無明顯變化，但是其污染會造成細胞之生長速率緩慢、細胞產生病變之型態改變等等變化。

一、造成支原體高污染率的原因為： 
      1、支原體size 0.1~0.8 um，無細胞壁，可透過一般過濾膜（0.22-0.45 um） 
      2、支原體污染時，沒有明顯的肉眼或一般光學顯微鏡可觀察到的特征變化 
      3、過去缺乏簡單、快速且可靠的檢測方式 
      4、細胞流通間缺乏品管，造成實驗室間的相互污染 
      5、研究或操作人員忽略污染問題

二、支原體污染了來源： 
      1、已受污染的細胞 
      2、操作人員的疏失 
      3、已受污染的培養基、血清 
      4、操作環境不良、實驗器具不潔等

    由于支原體為人體口腔中之正常菌叢，實驗室之操作人員的污染亦可能為污染源，須十分注意。而萬一細胞已受支原體污染時，*的處理原則為將細胞高壓滅菌后丟棄，以免污染其它潔凈的細胞株。但是若是堅持要作去除支原體污染，有以下幾種方法，只不過結果會與原始的細胞特性有差異。

三、去除支原體污染：  
      1、抗生素處理：BM-cyclin（Roche），MRA（mycoplasma removal agent，ICN），Ciprofloxcin（Bayer），Enrofloxacin（Bayer） 
      2、Nucleic acid metabolites：5-bromouracil，Hoechst 33258，bromodeoxyuridine 
      3、Anti-sera

四、預防與控制方面可從以下各點加強注意：

      1、設備方面： 
      (1)、使用已作支原體測試ok之細胞株 
      (2)、于另一隔離之區域操作未知是否有支原體污染之細胞 
      (3)、使用不添加抗生素的培養基培養細胞 

      2、檢測方面：定期以標準的支原體檢測方法檢測細胞、培養基、血清、ddH2O有否被支原體污染。

    實驗操作人員之無菌觀念與無菌操作技術之要求

五、支原體之檢測---直接培養法

    原理：直接培養支原體于培養基中，觀察其生長及菌落生成。

    特點：是目前zui直接與靈敏之步驟，亦是用來評估其它偵測新步驟之標準步驟。

    缺點：培養時間長，須3－5星期才能判斷。有些支原體不能在培養基培養出來。需同時培養支原體株作為正反應對照組，可能會造成污染。

    支原體生長較慢，所以先在液體培養基培養1~2周增殖后，再培養于agar plate上。需至少培養3星期后，才可斷定是否有支原體污染。所以整個測試需5個星期才知正確結果。