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    兔子神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)免疫組化試劑盒

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    更新時間:2017-05-30 04:20:54瀏覽次數:311次

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    兔子神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)免疫組化試劑盒 該試劑盒以HRP 標記的鏈霉親和素復合物(HRP Streptavidin Conjugate,HRP-SA)為基礎,可用于檢測細胞、組織內的特異性抗體抗原。有50T和100T兩種規格,歡迎新老客戶前來咨詢訂購。

    兔子神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)免疫組化試劑盒   
    該試劑盒以HRP 標記的鏈霉親和素復合物(HRP Streptavidin Conjugate,
    HRP-SA)為基礎,可用于檢測細胞、組織內的特異性抗體 抗原。該試劑盒具有靈
    敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的 一抗與相應靶抗原
    結合后,用生物化二抗與一抗特異性結合,zui后加入HRP-SA,形成抗原—特異
    一抗—*化二抗—HRP-SA 復合物,顯微鏡下觀察成像。
    兔子神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)免疫組化試劑盒   ,試劑盒所含試劑:
    試劑A 通透液:0.1% Triton-X 100 10 mL(選用)
    試劑B 封閉緩沖液(封閉用) 20 mL
    試劑C (*分裝)已稀釋的即用型p38 一抗(2.5ml)
    試劑D (*分裝)*化羊抗兔IgG 1 支
    (濃度1.5 mg/mL,稀釋比為1:300~1:500)100 μL+抗體稀釋液20ml
    試劑E HRP-SA 復合物1 支(濃度1 μM,稀釋比1:50~1:200)100 μL
    試劑F DAB 顯色液 5 ml
    用戶自備試劑:
    1. 10mM TBS(pH7.2~7.4)
    三羥基氨基甲烷1.21g

    加蒸餾水800mL,濃鹽酸調pH 值至7.2~7.4,zui后定容至1000mL
    TBS-T:TBS+Tween 20(0.05%體積比)
    2.抗原修復液(依檢測抗原不同而選擇不同的修復液)
    10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液
    檸檬酸0.38g
    檸檬酸三鈉2.45g
    加蒸餾水900mL,濃鹽酸調pH 值至6.0,zui后定容至1000mL
    或:0.5M EDTA 修復液(pH8.0)
    EDTA·2H2O 186.1g
    檸檬酸三鈉2.45g
    加蒸餾水700mL,用10mM NaOH 調pH 值至8.0,zui后定容至1000Ml
    3. 緩沖甘油封固劑10 mL
    4. Tween 20 5 mL
    石蠟包埋組織切片免疫染色
    實驗步驟(建議方案):
    石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度
    1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr;
    2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
    10 min;
    3.水化: 切片經下行酒精水化,無水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),85%
    乙醇2 min;75%乙醇2min,自來水沖洗,ddH2O 洗2×2min;
    4.抗原修復: 根據抗體說明書*方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫
    度達到98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗2×
    2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附1)* 注:有些抗原勿需修復,
    直接進入第5 步封閉。
    5.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育30 min;
    6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過夜;
    7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
    8.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育10 min;
    9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的*化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育
    30 min;
    10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
    11.封閉: 滴加試劑Tween 20,37℃濕盒孵育封閉20 min;
    12.加HRP-SA: 滴加用試劑C 稀釋的試劑E(1:50~200,終濃度5~20 nM),37
    ℃濕盒中孵育30 min;
    13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
    14.顯色:應用DAB 溶液(試劑F)顯色;
    15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
    16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
    17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
    注意事項:
    1. 修復后緩沖液須自然冷卻,自來水沖洗后方能把切片取出,驟冷有可能導致
    結晶或抗原封閉。
    2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到,用過的檸檬酸緩沖液不能反復使
    用。
    3. 若試劑為微量濃縮液,用前應低速離心,將內蓋和管壁附著的溶液離到底部。
    4. 封片前一定要換用TBS 充分洗滌,以便洗去組織上殘留的Tween 20,否則會
    影響結果觀察。
    5. 如須復染細胞核,則在封片前復染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封
    片。
    附1:
      ,抗原修復方法
    常用抗原修復液:檸檬酸緩沖液(0.01M pH6.0)、EDTA 抗原修復液(pH8.0 或
    9.0)等等。
    一、酶消化修復法
    切片脫蠟水化處理,TBS 沖洗,在組織上滴加*或*,37℃孵育
    20~30min 后TBS 沖洗即可。
    二、微波抗原修復法
    微波盒中加入抗原修復液微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料
    切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,中檔或高檔繼續微波10~15min,取出微波
    盒冷卻至室溫后,自來水沖洗,取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異,
    須自行調整。
    三、直接高壓抗原修復法
    取修復液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰,將組織切片置于耐高溫切片架上,修復
    液沸騰后放入切片架,蓋上鍋蓋,待噴氣后計時1.5~2.5min 即可脫離熱源,自
    然冷卻至室溫后自來水沖洗,取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。
    四、隔水式高壓抗原修復法
    不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰,微波盒中加入修復液于微波爐中加熱至沸
    騰,將切片放入微波盒中,再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋,待噴氣后計時
    4~8 min 即可關閉熱源,自然冷卻至室溫后自來水沖洗,取出切片。此方法適用
    于較難檢測或核抗原的修復。            

    YS02475BRabbit glial fibrillary acidic protein,GFAP Elisa試劑盒 

    YS02476B豚鼠白介素4(IL-4)免疫組化試劑盒Guinea pig interleukin 4,IL-4 Elisa試劑盒 

    YS02477B豚鼠免疫球蛋白G(IgG)免疫組化試劑盒Guinea pig Immunoglobulin G,IgG Elisa試劑盒 

    YS02478B豚鼠血清總補體(CH50)免疫組化試劑盒Guinea Pig 50% complement hemolysis,CH50 Elisa試劑盒 

    YS02479B豚鼠組胺(HIS)免疫組化試劑盒guinea pig Histamine,HIS Elisa試劑盒 

    YS02480B豚鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)免疫組化試劑盒guinea pig transforming growth factor β1,TGF-β1 Elisa試劑盒 

    YS02481B豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫組化試劑盒Guinea pig Tumor necrosis factor α,TNF-α Elisa試劑盒

    YS02482B豚鼠生長激素(GH)免疫組化試劑盒Guinea pig Growth hormone,GH Elisa試劑盒

    YS02483B豚鼠內皮素1(ET-1)免疫組化試劑盒guinea pig Endothelin 1,ET-1 Elisa試劑盒 

    YS02484B豚鼠免疫球蛋白E(IgE)免疫組化試劑盒guinea pig Immunoglobulin E,IgE Elisa試劑盒 

     

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