一、分離度
兩個組分怎樣才算達到*分離？首先是兩組分的色譜峰之間的距離必須相差足夠大，若兩峰間僅有一定距離，而每一個峰卻很寬，致使彼此重疊，則兩組分仍無法*分離；第二是峰必須窄。只有同時滿足這兩個條件時，兩組分才能*分離。
為判斷相鄰兩組分在色譜柱中的分離情況，可用分離度R作為色譜柱的分離效能指標。其定義為相鄰兩組分色譜峰保留值之差與兩個組分色譜峰峰底寬度總和之半的比值：
R=
R值越大，就意味著相鄰兩組分分離得越好。因此，分離度是柱效能、選擇性影響因素的總和，故可用其作為色譜柱的總分離效能指標。
從理論上可以證明，若峰形對稱且滿足于正態分布，則當R=1時，分離程度可達98%；當R=1.5時，分離程度可達99.7%因而可用R=1.5來作為相鄰兩峰已*分開的標志。
當兩組分的色譜峰分離較差，峰底寬度難于測量時，可用半峰寬代替峰底寬度，并用下式表示分離度： R’=
二、色譜分離基本方程式
R=1/4 ·（ ）·（ ）
n=（ ）2·n有效
R=1/4 ·（ ）
由分離度基本方程式可看出：
（1）分離度與柱效的關系（柱效因子） 分離度與n的平方根成正比。
（2）分離度與容量比的關系（容量因子）， k >10時，k/（k+1）的改變不大，對R的改進不明顯，反而使分析時間在為延長。因此k 值的范圍是1< k <10，在此范圍內，既可得到大的R值，亦可使分析時間在不至于過長。使峰的擴展不會太嚴重對檢測發生影響。
表2-2 k值對k/（k+1）的影響
| k 0.5 1.0 3.0 5.0 8.0 10 30 50 k/（k+1） 0.33 0.50 0.75 0.83 0.89 0.91 0.97 0.98 |
（3）分離度與柱選擇性的關系（選擇因子），α越大，柱選擇性越好,分離效果越好。分離度從1.0增加至1.5，對應于各α值所需的有效理論塔板數大致增加一倍。
分離度、柱效和選擇性參數之間的為：
L=16R2（ ）2·H有效
表3-3 在給定值下,獲得所需分離度對柱有效理論塔板數的要求
| a | n有效 |
| R=1.0 | R=1.5 |
| 1.00 1.005 1.01 1.02 1.05 1.07 1.10 1.15 1.25 1.50 2.0 | ∞ 650000 163000 42000 7100 3700 1900 940 400 140 65 | ∞ 1450000 367000 94000 16000 8400 4400 2100 900 320 145 |
三、分離操作條件的選擇
1．載氣及其流速的選擇
對一定的色譜柱和試樣，有一個的載氣流速，此時柱效zui高，根據下式
H=A+B/u+CU
用在不同流速下的塔板高度H對流速u作圖，得H-u曲線圖。在曲線的zui低點，塔板高度Hzui小（H
zui小） 。此時柱效zui高。該點所對應的流速即為流速u
，及 H
zui小可由式（14-17）微分求得：
=－＋C=0
u=
將式（14-28）代入式（14-17）得：
Hzui小=A+2
當流速較小時，分子擴散（B項）就成為色譜峰擴張的主要因素，此時應采用相對分子質量較大的載氣（N2，Ar ），使組分在載氣中有較小 的擴散系數。而當流速較大時，傳質項（C項）為控制因素，宜采用相對分子質量較小的載氣（H2,He ），此時組分在載氣中有較大的擴散系數，可減小氣相傳質阻力，提高柱效。
2．柱溫的選擇
柱溫直接影響分離效能和分析速度。首先要考慮到每種固定液都有一定的使用溫度。柱溫不能高于固定液的zui高使用溫度，否則固定液揮發流失。
3．固定液的性質和用量
固定液對分離是起決定作用的。一般來說，擔體的表面積越大，固定液用量可以越高，允許的進樣量也就越多。為了改善液相傳質，應使液膜薄一些。固定液液膜薄，柱效能提高，并可縮短分析時間。 固定液的配比一般用5：100到25：100，也有低于5：100的。不同的擔體為要達到較高的柱效能，其固定液的配比往往是不同的。一般來說，擔體的表面積越大，固定液的含量可以越高。
4．擔體的性質和粒度
要求擔體的表面積大，表面孔徑分布均勻。這樣，固定液涂在擔體表面上成為均勻的薄膜，液相傳質就快，柱效就可提高。擔體粒度均勻、細小，也有利于柱效提高。但粒度過小，柱壓降增大，對操作不利。
5．進樣時間和進樣量
進樣必須快，一般在一秒鐘之內。進樣時間過長，會增大峰寬，峰變形。進樣量一般液體0.1-5微升，氣體0.1-10毫升，進樣太多，會使幾個峰疊加，分離不好。
6．氣化溫度
在保證試樣不分解的情況下，適當提高氣化溫度對分離及定量有利。
