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    小鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)elisa試劑盒說明書

    時間:2012-6-19閱讀:1139
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      上海勁馬實驗設備有限公司
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    小鼠轉化生長因子β1TGF-β1)酶聯免疫分析
     
    試劑盒使用說明書
    本試劑盒僅供研究使用。
    檢測范圍:                                                           96T
    3pg/ml-120pg/ml
    使用目的:
    本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中轉化生長因子β 1TGF-β1)含量。實驗原理
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠轉化生長因子β 1TGF-β1)水平。用純化的小鼠轉化生長因子β 1TGF-β1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入轉化生長因子β 1TGF-β1),再與 HRP標記的轉化生長因子β 1TGF-β1)抗體結合,形成抗體 -抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉化生長因子β 1TGF-β1)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度( OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠轉化生長因子β 1TGF-β1)濃度。
    試劑盒組成

     

    1
    30倍濃縮洗滌液
    20ml×1
    7
    終止液
    6ml×1
    2
    酶標試劑
    6ml×1
    8
    標準品(240pg/ml
    0.5ml×1
    3
    酶標包被板
    12孔×8
    9
    標準品稀釋液
    1.5ml×1
    4
    樣品稀釋液
    6ml×1
    10
    說明書
    1
    5
    顯色劑 A
    6ml×1
    11
    封板膜
    2
    6
    顯色劑 B
    6ml×1/
    12
    密封袋
    1

     

    標本要求
    1           標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于 -20℃保存,但應避免反復凍融
    2           NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的( HRP)活性。
     
    操作步驟
    1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
    2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
    3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。
    4.配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
    5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復 5次,拍干。
    6.加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
    7.溫育:操作同 3
    8.洗滌:操作同 5
    9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻, 37℃避光顯色15分鐘.
    10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

    11.測定:以空白空調零, 450nm波長依序測量各孔的吸光度( OD值)。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。

     

    120pg/ml
    5號標準品
    150μl的原倍標準品加入 150μl標準品稀釋液
    60pg/ml
    4號標準品
    150μl5號標準品加入 150μl標準品稀釋液
    30pg/ml
    3號標準品
    150μl4號標準品加入 150μl標準品稀釋液
    15pg/ml
    2號標準品
    150μl3號標準品加入 150μl標準品稀釋液
    7.5pg/ml
    1號標準品
    150μl2號標準品加入 150μl標準品稀釋液

    OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

    注意事項

    1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

    2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

    3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

    4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數( n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6.底物請避光保存。

    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準 .

    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9.本試劑不同批號組分不得混用。

    10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

    保存條件及有效期

    1.試劑盒保存:;2-8℃。

    2.有效期: 6個月

    上海勁馬實驗設備有限公司是國內外專業的ELISA試劑盒,進口ELISA試劑盒,國產ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格,ELISA試劑盒批發供應商,主營產品有:ELISA試劑盒,進口ELISA試劑盒,國產ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格,ELISA試劑盒批發等,上海勁馬實驗設備有限公司不僅具有國內外的技術水平,更有良好的售后服務和的解決方案,洽談

    操作程序總結:
    計算
    以標準物的濃度為橫坐標, OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的

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