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    大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1試劑盒說明書

    時(shí)間:2011/5/11閱讀:602
    分享:

                       大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1試劑盒說明書

     
     

     

    檢測范圍:                                                          96T
    15 ng/L -400 ng/L
     
    使用目的:
    大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中轉(zhuǎn)化生長因子β1TGF-β1含量
    實(shí)驗(yàn)原理
    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1TGF-β1水平。用純化的大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1TGF-β1抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入轉(zhuǎn)化生長因子β1TGF-β1),再與HRP標(biāo)記的轉(zhuǎn)化生長因子β1TGF-β1抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉(zhuǎn)化生長因子β1TGF-β1呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1TGF-β1濃度。
    試劑盒組成

    1
    30倍濃縮洗滌液
    20ml×1瓶
    7
    終止液
    6ml×1瓶
    2
    酶標(biāo)試劑
    6ml×1瓶
    8
    標(biāo)準(zhǔn)品(800 ng/L)
    0.5ml×1瓶
    3
    酶標(biāo)包被板
    12孔×8條
    9
    標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    1.5ml×1瓶
    4
    樣品稀釋液
    6ml×1瓶
    10
    說明書
    1份
    5
    顯色劑A液
    6ml×1瓶
    11
    封板膜
    2張 
    6
    顯色劑B液
    6ml×1/瓶
    12
    密封袋
    1個(gè)

    標(biāo)本要求
    1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

    400 ng/L
    5號標(biāo)準(zhǔn)品
    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    200 ng/L
    4號標(biāo)準(zhǔn)品
    150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    100 ng/L
    3號標(biāo)準(zhǔn)品
    150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    50 ng/L
    2號標(biāo)準(zhǔn)品
    150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    25 ng/L
    1號標(biāo)準(zhǔn)品
    150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

     
     
    2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
    3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
    4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
    5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
    6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
    7.         溫育:操作同3。
    8.         洗滌:操作同5。
    9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
    10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
    11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
    3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
    4. 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物請避光保存。
    7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
    9.本試劑不同批號組分不得混用。
    10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
    保存條件及有效期
    2.有效期:6個(gè)月
     

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