8 ng/L	5號標準品	150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
4 ng/L	4號標準品	150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
2 ng/L	3號標準品	150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
1 ng/L	2號標準品	150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
0.5 ng/L	1號標準品	150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

上海勁馬實驗設備有限公司是一家生物*企業，主要從事免疫學、分子生物學和常規生化試劑的研發、銷售。并代理銷售Omega、Sigma、R&D、GBD、ATCC、HYCLONE等二十多家國外品牌，致力于為廣大高校、科研院所和企事業單位提供*的科研試劑和完善的技術服務，公司主營產品：ELISA試劑盒，免疫組化試劑盒，放免試劑盒，標準品，血清，抗體，培養基，細胞，生物試劑，實驗耗材等。

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人白介素6ELISA試劑盒操作步驟

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