Sepax ProAqa Excel親和色譜柱
概述
ProAqa Excel親和色譜柱適用于細胞系篩選或上游生物工藝優化和質量控制過程中快速準確的單克隆抗體定量。填料是由平均粒徑20 µm、孔徑1000-2000 Å的均一的PS/DVB填料顆粒與重組蛋白A配體偶聯而成，該配體能與除IgG3以外的免疫球蛋白以及含Fc的融合蛋白結合。填料具有機械強度，可以承受高流速和高壓操作。
技術參數
ProAqa Excel | 參數 |
填料基質(粒徑, 孔徑) | 均一的 PS/DVB(20 µm, 1000-2000 Å) |
固定配體 | 重組蛋白A |
色譜柱尺寸（內徑×長度） | 2.1 mm x 30 mm |
色譜柱材質 | 不銹鋼 |
Z大壓力 | 200 bar |
pH 范圍 | 1.2-13.0 |
Z大流速 | 5 mL/min |
推薦流速 | 1-3 mL/min |
CIP | 0.1 M NaOH |
結合緩沖液 pH | 6.6-7.5 |
壽命 | >2000次進樣 |
標準進樣量 | 10 µL |
IgG 檢測濃度 | 0.029-40 mg/mL* |
LOD | 0.29 µg |
均一的Sepax填料顆粒(20 µm) D90/D10<1.3
訂貨信息
| 規格 內徑×長度 （mm×mm） | 材質 | 柱體積（mL） | 訂貨號 |
標準規格 | |||
2.1×30 | 不銹鋼 | 0.1 | 271120980-2103S |
定制規格 | |||
2.1×50 | 不銹鋼 | 0.17 | 271120980-2105S |
4.6×35 | 不銹鋼 | 0.58 | 271120980-4603S |
4.6×50 | 不銹鋼 | 0.83 | 271120980-4605S |
4.6×100 | 不銹鋼 | 1.66 | 271120980-4610S |
填料特性
流速快達 3 mL/min
總循環（含平衡）時間可小于0.5 min
UV 280 nm: 0.029 - 7.50 mg/mL, LOD 0.294 µg
UV 300 nm: 0.117 - 40.0 mg/mL
空白對照
要使用高純度的緩沖液，緩沖液使用前需要排氣和過濾（0.22 μm）。進樣前，請務必做空白對照，并仔細檢查峰積分結果中是否存在噪音或基線繪制不正確。為了降低結合緩沖液和洗脫緩沖液轉變時引起的基線波動，建議使用：
（a）50 mM磷酸鹽（pH 7.0），0.15 M NaCl作為起始/沖洗溶液。
（b）100 mM磷酸鈉，0.15 M NaCl（pH 2.5）或100 mM，0.15 M NaCl（pH 2.5）作為洗脫緩沖液。
這些是對信號噪音有效的洗滌/洗脫液。鹽酸（HCl）能使抗體變性，所以洗脫產品如果需要生物活性的話，不建議添加HCl。
起始/沖洗溶液
（a）大多數情況下，可以使用簡單的緩沖液，例如10-100 mM的磷酸鹽或Tris。
（b）結合/洗脫緩沖液的pH范圍為6.0-7.5，但是請注意，在較高的pH范圍下結合力強。
（c）添加一些鹽（0.1-0.2 M NaCl或KCl）抑制蛋白間相互作用的非特異性吸附。
洗脫條件
對于分析應用，使用25-100 mM磷酸鹽（pH 2.0-3.5），含或不含高達150 mM的NaCl?？梢允褂玫钠渌疵摼彌_液成分包括磷酸鈉、鹽酸、、檸檬酸鹽、醋酸鹽以及其他含低pH成分的緩沖液。
由于抗體的結合/洗脫行為因種類和亞類而異，因此應憑經驗確定洗脫條件。
樣品準備和上樣
為了保證高效結合和避免柱子濾片堵塞，樣品一般按以下方式準備：
（a）溶解或交換樣品到起始/洗滌緩沖液，這對于大份樣品（大于25%柱體積）尤其重要。
（b）進樣前離心或用0.22 μm濾膜過濾樣品。
（c）熱處理血清樣品（56℃加熱30 min）去除殘留的纖維蛋白原，它們會在多次運行中阻塞色譜柱。
（d）盡可能對樣品脫脂，因為脂質會引起不可逆的結垢。
為保證高效結合及避免填料和色譜柱污染，需要確認上樣量：
（a） 圖2和圖3顯示了ProAqa Excel色譜柱的動態測試范圍。
（b） 其他抗體的結合能力取決于抗體來源和亞類。
（c） 需要優化結合和洗脫條件并用樣品確認，以確保達到結合平衡和洗脫。
（d） 在分析應用中，Z小和Z大載量應該通過標準曲線的線性確定（如圖2所示，對于樣品濃度在0.029-7.500 mg/mL的常用定量分析，可以將檢測波長設置為280 nm。如圖3所示，如果樣品濃度較高（高達40 mg/mL），波長可設置為300 nm。在該分析應用中，建議使用雙波長檢測（280 nm和300 nm）。
Sepax ProAqa Excel親和色譜柱
