50次 天南星染料法PCR鑒定試劑盒說明書 基因擴增儀

使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數值為橫軸，繪制標準曲線。
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環。
如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成；而Extension時間太長時，會出現Smear。
(1S,2S)-2-(二苯基膦)環己胺 97%Geniposide；京尼平苷/梔子苷柴胡顆粒Rat N-MID-OT(N-MID Osteocalcin) ELISA Kit

Rat Hepc 25(Hepcidin 25) ELISA Kit

(1S,2S)-(-)-1, 2－二苯基－1, 2－二胺 98%Potassium sorbate；山梨酸鉀饅頭改良劑Rat Estrogen ELISA Kit

Rat Estrone(Estrone) ELISA Kit

(1S,2S)-N-(對苯磺酰)-1,2-二苯基二胺 98%Senegenin；遠志皂苷元五香粉Rat E2(Estradiol) ELISA Kit

Rat HCY(Homocysteine) ELISA Kit

(1S,2S)-(+)-N,N'-二基環己烷-1,2-二胺 98%Leonurine hydrochloride；鹽酸益母草堿咖喱粉Rat GAGs(Glycosaminoglycan) ELISA Kit

Rat TGFBR1(TGF-beta receptor type-1) ELISA Kit

(1S,2S)-(-)-1,2-環己二胺D-鹽 98%Econazole nitrate；硝酸益康唑白胡椒粉Rat TGFBR2(TGF-beta receptor type-2) ELISA Kit

Rat DCP(Des-gamma carboxyprothrombin) ELISA Kit

(S,S)-2,6-雙(4-異基-2-惡唑啉-2-基)吡啶 99%Bisdemethoxycurcumin；雙去氧基姜黃素復配肉制品水分保持劑Rat FBXO32(F-box only protein 32) ELISA Kit

Rat 3-MH(3-methylhistidine) ELISA Kit

(S,S)-N-(對苯磺酰)-1,2-二苯烷二胺(對異基苯)釕(II) Butylated Hydroxyanisole/BHA；基羥基茴香醚復配肉制品水分保持劑Rat MTOR(Serine/threonine-protein kinase Mtor) ELISA Kit

Rat MTL5(Tesmin) ELISA Kit

二酰基[(S)-(-)-2,2'-雙(二-P-苯基酰)-1,1'聯萘]釕 95%Neoagarohexaose；新瓊六糖三黃散Rat CK-18/KRT18(CytokeRatin 18) ELISA Kit

Rat ENK(enkephalin) ELISA Kit

2,2′:6′,2′′-三吡啶 98%Doxorubicin hydrochloride；鹽酸阿霉素情散Rat IL1RL1(IL-1 Receptor Like 1) ELISA Kit

Rat CTRP15(Complement C1q tumor necrosis factor-related protein 15) ELISA Kit

三基 97%Kanamycin mono sulfate；硫酸卡那霉素冰糖雪梨香精Rat Acan(Aggrecan core protein) ELISA Kit

Rat AP12(Apelin 12) ELISA Kit
天南星染料法PCR鑒定試劑盒說明書β-肌動蛋白抗體納米鐵粉 99.9%，50nm2-[(三(羥基)基)]-1-磺酸鈉pUNO1-hTRAILa

促腎上腺皮質激素抗體納米鐵粉 99.9%，80nmTris磺酸pUNO1-hTRAM

肌動蛋白α抗體苯酮 GCS,≥99.5% (GC)地霉素pUNO1-hTRANCEa

神經絲蛋白抗體銨 AR,99.0%松油醇pUNO1-hTRANCEb

整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型1--2-萘酚-4-磺酸 ACS reagent, ≥98%三基酸鹽pUNO1-hTREM1

整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7茜素絡合指示劑 高純級,98%四甘醇pUNO1-hTREM2

內收蛋白抗體茜素絡合指示劑 Indicator三撐二胺pUNO1-hTREML2

脂肪組織分化相關蛋白抗體烯腈 Standard for GC(劇)硬脂酸酯pUNO1-hTREML4

脂聯素受體-1抗體鄰苯酸 Standard for GC, ≥99.5% (GC)基三銨pUNO1-hTREX1a

脂聯素受體-2抗體1,4-炔二醇  Standard for GC, ≥99.5% (GC)四銨pUNO1-hTRIAD3a
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，Z后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR