PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環。
如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成；而Extension時間太長時，會出現Smear。
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參數規格：
產品名稱：豬流行性腹瀉病毒(PEDV)核酸檢測試劑盒
產品規格：50T
產品貨號：FS-P10307
產品分類：熒光PCR法
產品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產品特點：
本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現定量檢測目的。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
ATCC33787培養基質量控制。模式菌株: no種屬: Vibrio│alginolyticus提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: CM0444生長條件: 37℃
JCM11558=CIP107954=LMG21403模式菌株: yes安全等級: 1種屬: Shewanella│marinintestinaSquid body提供形式: 凍干物模式菌株培養基: 471
日本鵝膏生長條件: 25-28℃培養基: 14提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結法；礦物油法；定期移植法
LMG3301=NCTC12171=CIP105838模式菌株: yes安全等級: 1種屬: Ochrobactrum│intermediumBlood culture提供形式: 凍干物模式菌株培養基: 2
小單孢菌屬抗細菌；抗大腸桿菌模式菌株: no淤泥提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: CM0012生長條件: 35-37C
AS2.368酒精酵母模式菌株: no種屬: Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: CM0013生長條件: 25-28℃
-279℃冰箱凍結；真空冷凍干燥
根瘤菌(紫云英)生物固氮模式菌株: no紫云英根系根瘤內提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: 0063生長條件: 28-30℃
葡萄球菌抗銅機理研究模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 451生長條件: 28℃
鐮霉菌培養基: 14模式菌株: no大型子實體提供形式: 斜面培養物安全等級: 1生長條件: 25 -80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法；定期移植法
腐霉生長條件: 32℃培養基: 0421提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no
尖鐮孢深海絲狀真菌模式菌株: no水樣/下層海水提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: 14生長條件: 28℃
地生隱球酵母生長條件: 25-28℃培養基: 13土壤提供形式: 斜面培養物模式菌株: no 真空冷凍干燥法
-280℃冰箱凍結；真空冷凍干燥
戴爾根霉培養基: CM0014糖化。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-32℃ 真空冷凍干燥法
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