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    茜素紅S染色液(1%,pH8.3)100ml售后服務(wù)

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    • 所在地上海市
    • 更新時(shí)間2017-07-07
    • 廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
    • 所在地區(qū)上海市
    • 實(shí)名認(rèn)證已認(rèn)證
    • 產(chǎn)品數(shù)量9968
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    茜素紅S染色液(1%pH8.3)100ml

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    茜素紅S染色液(1%,pH8.3)100ml售后服務(wù) 產(chǎn)品詳情

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    茜素紅S染色液(1%,pH8.3)100ml售后服務(wù)使用注意事項(xiàng)
    1.微量試劑取用前請(qǐng) 離心集液。
    27-AAD避光保存及使用。
    37-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
    4.本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測(cè)組織樣本。
    茜素紅S染色液(1%,pH8.3)100ml售后服務(wù)操作方法
    1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
    2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)515min
    3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
    4.請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
    A.熒光顯微鏡觀察
    1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
    2.對(duì)于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
    1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對(duì)照組;
    2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
    3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
    4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
    5)避光、室溫反應(yīng)5 min
    3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
    B.流式細(xì)胞儀分析
    用流式細(xì)胞儀檢測(cè),激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm
    7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
    茜素紅S染色液(1%,pH8.3)100ml售后服務(wù)實(shí)驗(yàn)步驟
    貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
    1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer
    2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過長,否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細(xì)胞;
    3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS4)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細(xì)胞;
    4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
    5Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
    6PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μLPI染色。
    7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL1×Binding Buffer
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