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產品名稱 | 結腸癌細胞：COLO 205 |
規格 | 1×10?cells/T25培養瓶 |
分類 | 細胞系 |
貨號 | GOY-01X0066 |
商品介紹：
名稱 結腸癌細胞：COLO 205 別稱Colo 205; CoLo 205; COLO-205; Colo-205; COLO.205; Colo205; COLO205; Co 205 種屬人類 年齡（性別）男性，70歲 組織來源結直腸腺癌，腹水轉移 生長特性半貼半懸 細胞形態上皮細胞樣 背景描述COLO 205細胞是由T·U·Sample等人于1957年從患有結腸癌的70歲男性白人的腹水分離而建系的，該病人在取腹水樣品前已用5-氟治療4-6周；COLO 205細胞角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。 生物安全等級1 生長培養基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例5×10^5-1×10^6cells/mL 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~25-30小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells). 基因表達情況carcinoembryonic antigen (CEA) 1.5 to 4.1 ng/10^6 cells cells/10 days; keratin; interleukin 10 (IL-10, interleukin-10), The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining. |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩定細胞狀態。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的*培養基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中培養；
4) 待細胞*貼壁后，培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。
培養操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
大鼠 MKRN2 基因全長ORF克隆
大鼠 CCT3 基因全長ORF克隆
大鼠 LDHA 基因全長ORF克隆
大鼠 PGK1 基因全長ORF克隆
大鼠 ADK 基因全長ORF克隆
大鼠 YWHAH 基因全長ORF克隆
大鼠 TECR 基因全長ORF克隆
大鼠 APMAP 基因全長ORF克隆
大鼠 SRSF3 基因全長ORF克隆
大鼠 BPGM 基因全長ORF克隆
結腸癌細胞：COLO 205 Goat Anti-Mouse IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的羊抗小鼠IgG 規格: 0.1ml
Donkey Anti-rabbit IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的驢抗兔IgG 規格: 0.1ml
FAM50B FAM50B蛋白抗體 規格: 0.2ml
10次 一步式PAGE染液 One-Step PAGESTAIN 4℃保存
PTOP 上皮質發育異常同源蛋白抗體 規格: 0.2ml
Rabbit Anti-dog IgG/RBITC 羅丹明標記的兔抗狗IgG 規格: 0.3ml
STK31 /蛋白激31抗體 規格: 0.2ml
phospho-SHC(Tyr349) 磷酸化SH2結構域轉化蛋白1抗體 規格: 0.1ml
2 ug pYr-AdShuttle- 4 pYr-AdShuttle- 4 低溫運輸，-20℃保存
1 管 SMD1163酵母菌 X33 Yeast Strain -80℃保存
1g 多聚半乳糖醛酸鈉鹽 Polygalacturonic Acid Sodium Salt 室溫保存
EC肉湯顆粒 E.Coli Broth 300ml/袋*10
