組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
服務(wù)流程：
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
解淀粉芽孢桿菌染料法qPCR試劑盒 | 50次 | YS-P013645 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
猴紅生成素受體(EPOR) 4--N-酰-β-D-氨半乳糖苷離子通道蛋白Kv1.3抗體
猴蛋白S(PROS)2-溴咪唑并[1,2-a]吡磷酸化KLF5抗體
猴結(jié)蛋白(Des) 1,2-磷酸化KLF5抗體
猴質(zhì)衍生因子1(SDF-1/CXCL12)蝙蝠葛苷特異性離子通道蛋白抗體
猴CXC趨化因子受體3(CXCR3) TBB(4,5,6,7-四溴-1H-并三唑)沉默驅(qū)動(dòng)蛋白KIF4A抗體
猴多巴受體D5(D5R/DRD5)3-羥黃酮ATP敏感離子通道蛋白抗體
猴髓鞘型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP8)銀杏酸C17:1KIAA1462蛋白抗體
猴酪氨酸羥化酶(TH) 銀杏酸C15:1KIAA1549蛋白抗體
猴CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白γ(C/EBPγ) 銀杏酸C13:0，白果酸C13:0爾曼氏細(xì)小病VP1/VP2抗體(大鼠潛在病KRV)C端
猴GDP解離抑制因子1(GDI1)AZD9291Kelch樣蛋白20抗體
猴微纖絲相關(guān)蛋白4(MFAP4) AZD9291 Mesylate激肽釋放酶抑制劑抗體
猴脂蛋白關(guān)聯(lián)磷脂酶A2(LpPLA2)乳酸鏈球菌素;乳鏈菌肽;尼生素kelch樣蛋白7抗體
猴Apelin 36(AP36) 鹽霉素,沙利霉素TWIK相關(guān)酸敏感離子通道蛋白9抗體
猴α1抗胰蛋白酶(α1-AT)仙茅苷激肽釋放酶6抗體
猴二氫嘧啶脫氫酶(DPYD) 丹皮酚原苷；牡丹酚原甙激肽釋放酶8抗體
猴硫酸皮膚素(DS) 氧化槐定堿(標(biāo)準(zhǔn)品)血漿激肽釋放酶抗體
解淀粉芽孢桿菌染料法qPCR試劑盒Phospho-Bcr(p-Tyr177)/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化T淋巴受體抗體IgGN-酰-L-色氨酸 98%
BCRP/ABCG2/BXP-21 /FITC 熒光素標(biāo)記三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體IgGN-酰-D-蛋氨酸 99%
Bdkrb2/B2R/FITC 熒光素標(biāo)記緩激肽B2受體抗體IgGN-CBZ-D-氨酸 96%
BDNF/FITC 熒光素標(biāo)記BDNF蛋白抗體IgGDL-氨酸酯鹽酸鹽 98%
BECN1/FITC 熒光素標(biāo)記一種抑癌因抗體IgGL-天門冬氨酸-4-叔丁酯 98%
EpCAM/CD326/FITC 熒光素標(biāo)記上皮特異性EpCAM/CD326蛋白抗體IgGN-酰-D-色氨酸 98%
Beta-casein( Beta-casein)/FITC 熒光素標(biāo)記 β-酪蛋白(抗體)IgGD-氨 98%
BFGF/FITC 熒光素標(biāo)記堿性成纖維生長(zhǎng)因子抗體IgGD-a-氨己二酸 97%
